Figures (3)  Tables (5)

    • Figure 1. 

      (a) Mass of secondary metabolites produced by 12 fungal isolates cultivated in different media: YM = yeast malt medium; ZM = ZM ½ media; Q6 = Q6 ½ media; BR = brown rice media. (b) Enlarged view of panel (a) showing YM, ZM, and Q6. Statistical significance is denoted as follows: ** p < 0.01; **** p < 0.0001.

    • Figure 2. 

      Culture morphology and microscopic morphology of active endophytic fungi observed under a compound light microscope at 1,000× magnification (oil immersion objective). (a) NA-001-Lv-C. (b) NA-001-Lv-D. (c) NA-001-Lv-E. (d) NA-001-Lv-F. (e) NA-001-Lv-G. (f) NA-001-St-B. (g) NA-001-St-D. (h) NA-001-St-H. (i) NA-002-Lv-X. (j) NA-002-St-C. (k) NA-003-St-C.

    • Figure 3. 

      TLC profile of active crude fungal extracts. The TLC plate was viewed under (a) visible light, and (b) 365 nm using 7:2 EtOAc-MeOH solvent system and ethanol sulfuric acid spray reagent for derivatization. Active extracts were separated per fungal isolates by solid lines.

    • Plant code Host plant Plant part Total number of isolates Endophytic fungus code of selected isolates
      001 O. cumingiana Leaves 7 NA-001-Lv-C
      NA-001-Lv-D
      NA-001-Lv-E
      NA-001-Lv-F
      NA-001-Lv-G
      Stem 7 NA-001-St-B
      NA-001-St-D
      NA-001-St-H
      002 A. cagayanensis Leaves 6 NA-002-Lv-X
      Stem 6 NA-002-St-C
      003 P. arborea Leaves 3 −
      Stem 4 NA-003-St-C
      017 D. clusiflorum var. megalanthum Leaves 7 KA-017-Lv-A
      Stem 2 −
      Total 42 12
      − indicates none.

      Table 1. 

      Endophytic fungi isolated from the leaves and stems of Philippine endemic Annonaceae species.

    • Isolate code Extract code Extract yield (mg) MIC (µg/mL)
      Ef Sa Kp Ab Pa Eh
      NA-001-Lv-C YM-001-Lv-C-BE 7.3 − − − − − −
      ZM-001-Lv-C-BE 3.5 u u u u u u
      Q6-001-Lv-C-BE 37.4 − − − − 1,000 62.5
      BR-001-Lv-C 54.3 − 62.5 − − − −
      NA-001-Lv-D YM-001-Lv-D-BE 5 u u u u u u
      ZM-001-Lv-D-BE 9.8 − − − 1,000 500 −
      Q6-001-Lv-D-BE 16.7 − − − − − −
      BR-001-Lv-D 38.2 − − − − − −
      NA-001-Lv-E YM-001-Lv-E-BE No growth u u u u u u
      ZM-001-Lv-E-BE 46.6 − − 7.81 1,000 − −
      Q6-001-Lv-E-BE 16.9 − − − − − −
      BR-001-Lv-E 195.7 − − − − − −
      NA-001-Lv-F YM-001-Lv-F-BE 13.1 − − − − − 250
      ZM-001-Lv-F-BE 10.3 − − − − − −
      Q6-001-Lv-F-BE 18.4 − − − − − −
      BR-001-Lv-F 193.3 − 62.5 − − − −
      NA-001-Lv-G YM-001-Lv-G-BE 5.2 u u u u u u
      ZM-001-Lv-G-BE 9.1 − − − − 250 −
      Q6-001-Lv-G-BE 17.1 − − − − 500 −
      BR-001-Lv-G 41.9 − − − − − −
      NA-001-St-B YM-001-St-B-BE 12.1 − − − − 500 −
      ZM-001-St-B-BE 9.5 − − − 500 1,000 −
      Q6-001-St-B-BE 14.7 − − − 1,000 125 −
      BR-001-St-B 296.2 − − − − 250 −
      NA-001-St-D YM-001-St-D-BE 14 − 1,000 − 250 1,000 −
      ZM-001-St-D-BE 17.2 − 1,000 − 7.81 62.5 −
      Q6-001-St-D-BE 18.9 − − − 500 62.5 −
      BR-001-St-D 202.3 − 125 15.63 250 7.81 250
      NA-001-St-H YM-001-St-H-BE 10.5 − − 15.63 500 1,000 −
      ZM-001-St-H-BE 8.5 1,000 1,000 7.81 500 − −
      Q6-001-St-H-BE 23.6 − − − − − −
      BR-001-St-H 51.4 − − − − − −
      NA-002-Lv-X YM-002-Lv-X-BE 18.3 1,000 125 − − 1,000 −
      ZM-002-Lv-X-BE 7.9 − − − − − −
      Q6-002-Lv-X-BE 12.7 − − − − − −
      BR-002-Lv-X 122.5 − − − − − −
      NA-002-St-C YM-002-St-C-BE 7.3 − − − 250 − 500
      ZM-002-St-C-BE 8.1 − − − − − −
      Q6-002-St-C-BE 28.1 − − − − − −
      BR-002-St-C 195.9 − − − − − −
      NA-003-St-C YM-003-St-C-BE 28.2 500 62.5 − 125 1,000 1,000
      ZM-003-St-C-BE 13.7 − − − 500 500 −
      Q6-003-St-C-BE 14.5 − 62.5 − 250 1,000 −
      BR-003-St-C 196.4 − − − − − −
      KA-017-Lv-A YM-017-Lv-A-BE 19.1 − − − − − −
      ZM-017-Lv-A-BE 12 − − − − − −
      Q6-017-Lv-A-BE 21.1 − − − − − −
      BR-017-Lv-A 663.1 − − − − − −
      Culture media: YM = yeast malt medium; ZM = ZM ½ media; Q6 = Q6 ½ media; BR = brown rice media. ESKAPE pathogens: Ef = E. faecium; Sa = S. aureus; Kp = K. pneumoniae; Ab = A. baumannii; Pa = P. aeruginosa; Eh = E. hormaechei; − = no antibacterial activity; u = untested; Amikacin (28 µg/mL) was used as positive control for E. faecium and ciprofloxacin (28 µg/mL) was used as positive control for other ESKAPE pathogens. The extract with the most promising antibacterial activity is in bold.

      Table 2. 

      Extract yield and minimum inhibitory concentrations (MIC, µg/mL) of selected endophytic fungal isolates of Annonaceae species against ESKAPE pathogens.

    • Extract code IC50 (µg/mL) %RSA ± SD
      Q6-001-Lv-C-BE − 13.52 ± 2.28
      BR-001-Lv-C − 31.26 ± 5.99
      ZM-001-Lv-D-BE 102.7 72.31± 0.94
      ZM-001-Lv-E-BE 56.03 77.06 ± 0.27
      YM-001-Lv-F-BE − 48.77 ± 2.23
      BR-001-Lv-F − 28.36 ± 2.92
      ZM-001-Lv-G-BE 65.85 68.74 ± 1,74
      Q6-001-Lv-G-BE 87.47 58.67 ±2.86
      YM-001-St-B-BE ND 54.34 ± 0.58
      ZM-001-St-B-BE ND 56.65 ± 0.62
      Q6-001-St-B-BE 200.9 58.02 ± 4.49
      BR-001-St-B ND 52.04 ± 0.82
      YM-001-St-D-BE ND 62 ± 1.67
      ZM-001-St-D-BE 133.6 61.46 ± 0.52
      Q6-001-St-D-BE 205.2 74.28 ± 1.34
      BR-001-St-D 443.6 82.31 ± 1.28
      YM-001-St-H-BE 435.7 88.99 ± 2.12
      ZM-001-St-H-BE ND 53.16 ± 0.89
      YM-002-Lv-X-BE 213.5 98.85 ± 0.23
      YM-002-St-C-BE 121 59.85 ± 0.94
      YM-003-St-C-BE ND 91.73 ± 1.11
      ZM-003-St-C-BE − 11.33 ± 3.31
      Q6-003-St-C-BE 63.29 61.32 ± 4.39
      AA 1.18 76.79 ± 1.04
      BHT 24.57 78.59 ± 0.82
      − = no antioxidant activity; ND = not determined; BHT= Butylated hydroxytoluene; AA= Ascorbic acid The extract with the most promising antioxidant activity is in bold.

      Table 3. 

      IC50 values (µg/mL), and radical scavenging activity of anti-ESKAPE active extracts (at 1,000 µg/mL), AA, and BHT in DPPH assay.

    • Extract code % Inhibition
      Q6-001-Lv-C-BE 0
      BR-001-Lv-C 0
      ZM-001-Lv-D-BE 16%
      ZM-001-Lv-E-BE 24%
      YM-001-Lv-F-BE 34%
      BR-001-Lv-F 90%
      ZM-001-Lv-G-BE NT
      Q6-001-Lv-G-BE 32%
      YM-001-St-B-BE 22%
      ZM-001-St-B-BE 17%
      Q6-001-St-B-BE NT
      BR-001-St-B 16%
      YM-001-St-D-BE 20%
      ZM-001-St-D-BE 21%
      Q6-001-St-D-BE 2%
      BR-001-St-D 0
      YM-001-St-H-BE 4%
      ZM-001-St-H-BE NT
      YM-002-Lv-X-BE 96%
      YM-002-St-C-BE NT
      YM-003-St-C-BE 21%
      ZM-003-St-C-BE 11%
      Q6-003-St-C-BE 19%
      NT= not tested; Most promising extracts are highlighted in bold.

      Table 4. 

      Percent inhibition activity of anti-ESKAPE fungal extracts (64 µg/mL) against M. tb. H37Rv in MABA.

    • Extract code ALK ANQ ANT C TS IN
      Q6-001-Lv-C-BE − − − − − −
      BR-001-Lv-C − − + − ++ ++
      ZM-001-Lv-D-BE − − − − − −
      ZM-001-Lv-E-BE − − ++ − + ++
      YM-001-Lv-F-BE − − − − − +
      BR-001-Lv-F − − + − + +
      ZM-001-Lv-G-BE − − − − − −
      Q6-001-Lv-G-BE − − − − − −
      YM-001-St-B-BE − − − − + −
      ZM-001-St-B-BE − − − − − −
      Q6-001-St-B-BE − − − − − −
      BR-001-St-B − − − − + −
      YM-001-St-D-BE − − − + − −
      ZM-001-St-D-BE − − + − − −
      Q6-001-St-D-BE − − − − − −
      BR-001-St-D − − ++ − − −
      BR-001-St-E − − − − − −
      ZM-001-St-H-BE − − − + − −
      Q6-001-St-H-BE − − − − − −
      YM-002-Lv-X-BE − − + − − −
      YM-002-St-C-BE − − − + − −
      YM-003-St-C-BE − − + − + −
      ZM-003-St-C-BE − − + − + −
      Q6-003-St-C-BE − − + − + −
      ALK = alkaloids; ANQ = Anthraquinones; ANT = Anthrones; C = Coumarins; TS = Terpenes and sterols; IN = indoles; + indicates the relative abundance of certain mycoconstituent; − = absence; The most promising extract is highlighted in bold.

      Table 5. 

      Mycoconsitutents present in the active crude fungal extracts.